前言

子宮內膜癌(endometrial carcinoma)又稱(chēng)子宮體癌，原發(fā)于子宮內膜上皮，是女性生殖道三大惡性腫瘤之一，約占女性癌癥總數的7％，占女性生殖道惡性腫瘤的20％~30％，其發(fā)病率有明顯上升趨勢。發(fā)病年齡漸趨年輕化，小于40歲患者的比例由過(guò)去的1％～8％上升至13.3％。子宮內膜癌是女性圍絕經(jīng)期出血的重要原因，易誤診為月經(jīng)不調而延誤診斷，其病因迄今尚未明確，但主要與雌激素的長(cháng)期刺激有關(guān)。用于復制子宮內膜癌的動(dòng)物主要是免疫缺陷小鼠，少數采用裸大鼠。

部分造模方法

使用動(dòng)物：裸鼠

【造模機制】：

1.將人子宮內膜癌細胞注射于裸鼠皮下或者子宮腔，分別建立皮下瘤和原位瘤?？捎镁G色熒光蛋白標記細胞，活體觀(guān)察腫瘤細胞的淋巴結轉移情況。

2.將人原發(fā)子宮內膜癌手術(shù)切除標本移植到裸鼠皮下建立動(dòng)物模型。

【造模方法】：

1.小鼠

⑴選4~5周齡BALB/c-nu/nu裸鼠，雌性，體重10~12g。人子宮內膜癌細胞株(lshikawa細胞株，HEC-1A或者HEC-1B細胞株)，取對數生長(cháng)期細胞進(jìn)行實(shí)驗。

⑵模型制備：消化收集人子宮內膜癌細胞，分別以800r/min離心5~8分鐘，棄上清液，按接種濃度5×10⁷/0.1ml稀釋細胞。消毒裸鼠左下肢近腹股溝皮膚處，接種后每天觀(guān)察注射點(diǎn)有無(wú)破潰紅腫，以皮下結節直徑超過(guò)0.5cm為成瘤標準，2周左右成瘤。至腫瘤長(cháng)至1cm3時(shí)取出瘤組織塊，于含10％胎牛血清的培養液。將組織塊切成1.5mm×1.5mm×3mm瘤塊，分別以小切口方式及無(wú)菌套管針進(jìn)行皮下接種，小切口絲線(xiàn)縫合1針。置于恒溫消毒的獨立通風(fēng)籠盒內，觀(guān)察裸鼠成瘤情況，每3天以游標卡尺測量腫瘤大小1次，至接種后45天，并進(jìn)行病理檢查。

⑶模型檢測：①體內成瘤生長(cháng)曲線(xiàn)的測定：測裸鼠體重和腫瘤體積，并用游標卡尺測量腫瘤的長(cháng)(L)、寬(W)、高(H)，腫瘤體積(V)按公式計算：V=π/6(L×W×H)，單位為厘米(cm)。部分腫瘤組織用10％甲醛固定，部分腫瘤組織儲存在液氮中備用。②移植瘤的病理學(xué)檢查：處死荷瘤裸鼠后，觀(guān)察移植瘤的形態(tài)，取新鮮腫瘤組織進(jìn)行組織學(xué)測定及常見(jiàn)癌基因的免疫組織化學(xué)的檢測。③移植瘤DNA倍體檢測：新鮮的腫瘤組織塊，直徑約5mm，在200目銅網(wǎng)上稍用力摩擦，將其制備成單細胞懸液，用流式細胞儀測定，以子宮癌細胞株的檢測結果作為對照。④癌基因的免疫組化檢測：子宮癌細胞株的檢測結果作為對照。

2.大鼠 選裸大鼠。凍存Ishikawa細胞復蘇后，培養至對數生長(cháng)期，在裸大鼠后肢近腹側的疏松皮下做一皮丘，內含0.5ml細胞懸液(1×10⁶個(gè)）。2周后，將腫瘤修剪成2mm3瘤塊，放入盛有等滲生理鹽水的平皿中并置于冰上備用。裸大鼠麻醉后， 將其下腹正中做一長(cháng)約2cm切口，暴露雙側子宮，切開(kāi)左側子宮中上1/3處子宮前壁全層，用顯微鑷將瘤塊植入宮腔。

【模型特點(diǎn)】：

荷瘤裸鼠晚期明顯消瘦，活動(dòng)力、反應力均下降，出現惡病質(zhì)，直至衰竭死亡。由接種皮下瘤組織塊的第二代移植瘤生長(cháng)曲線(xiàn)可知，接種組織塊在短時(shí)期內即可觀(guān)察到腫瘤的膨脹性生長(cháng)通過(guò)對比可觀(guān)察到腫瘤組織塊鼠間移植的第二代腫瘤比原代細胞液中的皮下腫瘤生長(cháng)速度快。裸大鼠皮下瘤生長(cháng)2周時(shí)行低齡裸大鼠宮腔原位移植，成瘤率可達70％。

【模型的評估和應用】：

通過(guò)建立人子宮內膜癌細胞株小鼠皮下移植瘤模型，模擬人體子宮內膜癌的生長(cháng)環(huán)境，符合人體子宮內膜癌的生物學(xué)特點(diǎn)，可以作為探索人子宮內膜癌中藥治療及生物治療和客觀(guān)評價(jià)治療手段效果的合適的動(dòng)物模型。裸大鼠宮腔原位移植后3~4周腫瘤生長(cháng)局限在子宮內，肉眼既能探及腫瘤又不發(fā)生轉移，這恰好符合人類(lèi)早期子宮內膜癌的臨床特點(diǎn)。裸大鼠體型、器官血管等都較裸小鼠大，更適于體內實(shí)驗研究的復雜操作，尤其是其盆腔血管較粗大，可用于人類(lèi)腫瘤介入治療的實(shí)驗研究。

參考文獻：

1.孟麗榮，張淑蘭，魯艷明，等．建立人子宮內膜癌裸鼠皮下移植瘤模型及其生物學(xué)特性的探討．中國腫瘤臨床，2007,34(22): 1306-1312

2.賈玖麗，馬曉欣，柯孝瑜．人子宮內膜癌瘤組織塊活體移植瘤動(dòng)物模型的建立．現代腫瘤醫學(xué)，2013,21(4):727-730

3.徐潔，程明軍，周文江，等．裸大鼠人子宮內膜癌模型的建立和評價(jià)．現代婦產(chǎn)科進(jìn)展，2008, 17 (7):497-500

4.Cabrera S,Llauradó M,CasteUví J,et al. Generation and characterization of orthotopic murine models for endometrial cancer. Clin Exp Metastasis,2012, 29 (3): 217-227