前言

艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)在1981年首次發(fā)現于美國，隨后確定其病原體為人類(lèi)免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV),HIV展于反轉錄病毒屬成員，是一種感染人類(lèi)免疫系統細胞的慢病毒。病毒基因組由兩條相同的正鏈RNA組成，全長(cháng)9.8kb，分別編碼Gag、Pol,Env結構蛋白及Tat、Rev、Vpu、Vpr、Vif、Nef等輔助蛋白。HIV有兩種血清型，分別是HIV-1和HTV-2，最常見(jiàn)的為HIV-1感染。HIV傳播途徑主要包括性傳播、血液傳播和母嬰傳播等途徑進(jìn)行傳播，感染后主要侵犯免疫細胞，包括T細胞、單核巨噬細胞、樹(shù)突狀細胞等。細胞表面表達的CD4分子是HIV受體，HIV囊膜糖蛋白gp120與細胞膜上CD4分子結合后可導致感染的發(fā)生，AIDS患者臨床表現以CD4+T淋巴細胞進(jìn)行性減少和免疫缺陷為特征，常伴有實(shí)質(zhì)器官（腦、淋巴結和肺等）的炎性疾病、神經(jīng)障礙和惡性腫瘤。自HIV被發(fā)現以來(lái)，科學(xué)家們即開(kāi)始AIDS動(dòng)物模型的研究工作，小鼠、兔及非人靈長(cháng)類(lèi)動(dòng)物都曾用于A(yíng)IDS動(dòng)物模型的研究。根據動(dòng)物對HIV的敏感性及造模方法，AIDS動(dòng)物模型分為非人靈長(cháng)類(lèi)動(dòng)物模型、轉基因小鼠模型及人源化小鼠模型。

非人靈長(cháng)類(lèi)動(dòng)物由于飼養成本高，且需要特殊的飼養環(huán)境，更重要的是目前針對靈長(cháng)類(lèi)動(dòng)物的試劑很少，這些因素都限制了其在動(dòng)物模型研究中的應用。相比較而言，嚙齒類(lèi)動(dòng)物體型小、易于飼養、試劑來(lái)源方便等因素決定了其在動(dòng)物模型研究中有獨特的優(yōu)勢。

部分造模方法

使用動(dòng)物：小鼠

【造模機制】：

小鼠對HIV-1病毒不易感，HIV-1病毒不能在其體內增殖。產(chǎn)生這種現象的原因一是小鼠和人的CD4分子序列有差異，導致HIV-1囊膜蛋白不能結合到鼠CD4+T細胞。也有研究發(fā)現HIV-1病毒序列中長(cháng)末端重復序列(long terminal repeat,LTR)介導的轉錄活性在鼠源性細胞活性較低，這也是導致HIV-1病毒不能感染小鼠的原因之一。此外，HIV-1病毒的一些輔助調控蛋白，如，核輸出信號分子Rev在鼠源性細胞中的功能下降明顯，不能有效介導HIV-1mRNA出核，從而影響病毒蛋白翻譯和包裝。隨著(zhù)轉基因技術(shù)的發(fā)展，將HlV-1病毒受體CD4及其輔助受體CCR5和CXCR4基因融合后顯微注射到小鼠受精卵細胞， 可制備表達人CD4-CCR5/CXCR4轉基因小鼠，該小鼠由于表達HIV-1病毒受體及輔助受體，因而對HIV-1病毒的易感性提高，感染后可表現出AIDS部分癥狀。將HIV-1病毒全序列或結構基因/調控基因克隆后通過(guò)顯微注射方法也可建立表達HIV-1特異蛋白的轉基因小鼠。

【造模方法】：

通過(guò)顯微注射方法建立的表達HIV-1病毒全序列或結構基因／調控基因的轉基因小鼠可直接用于抗HIV藥物篩選、疫苗評價(jià)等相關(guān)研究領(lǐng)域。300 TCID50的HIV-1病毒脾內接種或8000TCID50HIV-1病毒靜脈接種CD4-CCR5轉基因小鼠，2~4周后動(dòng)物臟器中可檢測到HIV-1病毒DNA。

【模型特點(diǎn)】：

1.表達HIV-1病毒序列轉基因小鼠 HIV-1前病毒DNA序列顯微注射到受精卵細胞后制備出可用于A(yíng)IDS研究的轉基因小鼠，子代動(dòng)物中50%~80％表現為表皮增生、淋巴炎癥、脾大及肺淋巴細胞浸潤等病理表現，皮膚、脾臟及淋巴結中可檢測到HIV病毒顆粒。也有研究者用缺失Gag-Pol基因的HIV-1病毒基因序列制備AIDS轉基因小鼠模型，該小鼠腎臟中可檢測到HIV-1的特異性表達，后期小鼠可發(fā)展為有蛋白尿癥狀的腎病表現，致死率較高，因此該小鼠用于HIV-1引起的腎病模型研究。表達復制缺陷性HIV-1的轉基因小鼠也可發(fā)展有進(jìn)行性腎小球硬化為表現的嚴重腎病綜合征。表達Rev蛋白的轉基因小鼠腎小球硬化，表皮增生，小鼠皮膚組織中也可檢測到病毒RNA。這些模型是研究HIV相關(guān)腎病的良好模型。研究發(fā)現用MMTV啟動(dòng)子代替HIV啟動(dòng)子后，Env蛋白的gp160、gp120和Gag蛋白的p55、p24在轉基因小鼠體內表達上調，該現象尤其在哺乳期雌性小鼠中表現尤甚。

2.HIV-1 LTR轉基因小鼠 機體感染HIV-1后有較長(cháng)的潛伏期，臨床癥狀出現較晚，這與病毒轉錄活性密切相關(guān)。研究發(fā)現一些外界因素（如細胞因子、紫外線(xiàn)等）及具有轉錄活性的調控元件可加速病毒的致病過(guò)程，基于此研究者用HIV基因中具有轉錄活性的LTR制備轉基因小鼠，HIV-1LTR與報告基因大腸埃希菌氯霉素?；D移酶(chloramphenicol transferase,CAT)或人抗胰蛋白酶基因(α-1 antitrypsin,α-1-AT)融合后建立了轉基因小鼠，該小鼠眼組織中CAT表達升高5倍，血清中α-1-AT表達上調10~20倍。在外界因素作用下， 如紫外線(xiàn)照射后，皮膚組織中CAT可上調30倍以上。表達HIV-1 LTR Tat的轉基因小鼠可在皮膚組織中檢測到LTR Tat RNA的表達，且在紫外線(xiàn)B或C作用下，皮膚LTR Tat RNA表達水平可達10倍以上。HIV-1感染后可引起神經(jīng)系統病變，如癡呆綜合征等(AIDS dementia complex)，且HIV-1病毒能否在神經(jīng)元細胞中復制也不清楚，HIV-1 LTR­LacZ轉基因小鼠體內多個(gè)臟器均可表達LacZ RNA或蛋白，尤其是腦、視網(wǎng)膜及中樞神經(jīng)元細胞檢測到LacZ RNA表達，這些結果表明HIV-1可在神經(jīng)元細胞復制。

3.HIV調控蛋白轉基因小鼠

⑴Tat:Tat是HIV復制過(guò)程中重要的調控蛋白，具有轉錄活性，有研究者認為T(mén)at活性有一定的種屬特異性，其轉錄活性只能在人源性細胞中具有，而在鼠源性細胞中不具備此功能。但表達HIV-1 LTR Tat的轉基因小鼠表明Tat活性物種屬特異性，小鼠可產(chǎn)生皮膚損傷的臨床表現，這點(diǎn)與AIDS患者卡波西肉瘤極為相似，皮膚病變及增生在雄性小鼠中可維待一年以上，超過(guò)18個(gè)月的雄性Tat轉基因鼠肝癌發(fā)生率大于其他動(dòng)物。

⑵Nef:Nef蛋白是一種負調控因子，能夠增強病毒的復制能力和感染性。Nef基因以人CD2T細胞特異性調控元件及其LCR調控后制備的轉基因小鼠可明顯降低外周血CD4+T細胞數量。此外，Nef基因在鼠T細胞受體Vβ8.3的β鏈增強子/啟動(dòng)子控制下制備的轉基因鼠CD4+T細胞數量下降明顯、胸腺萎縮、脾及淋巴結腫大，多數動(dòng)物在4~6個(gè)月內死亡。

4.表達CD4及CCR5和CXCR4轉基因小鼠 CD4及CCR5和CXCR4是HIV病毒受體和輔助受體，前已論述由于人CD4、CCR5和CXCR4與小鼠的這些分子序列差異可能導致小鼠對HIV-1不敏感。表達人CD4及其輔助受體CCR5的轉基因小鼠外周血單核細胞及脾細胞中可檢測到巨噬細胞嗜性HIV毒株，脾及淋巴結均可檢測到HIVDNA，但病毒不能在這些組織中增殖。表達人CD4及CXCR4轉基因小鼠對T細胞嗜性HIV較為敏感，外周血中CD4+T細胞數量下降明顯。

【模型的評估和應用】：

目的基因通過(guò)顯微注射或其他轉基因方法導入到受精卵細胞后，可通過(guò)PCR或Southern blot方法檢測目的基因在動(dòng)物體內表達。轉基因小鼠常用于HIV發(fā)病機制研究、抗HIV-1藥物篩選及疫苗學(xué)研究等。

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