前言

年齡相關(guān)性黃斑變性(age related macular dege­neralion, AMD)是65歲以上老年人致盲的主要原因。AMD分為無(wú)新生血管生成的干性以及新生血管生成的濕性表現。濕性AMD患者發(fā)生CNV是導致視力喪失的最常見(jiàn)因素。本章將介紹CNV的造模方法。

部分造模方法

使用動(dòng)物：小鼠、家兔、獼猴

【造模機制】：

激光誘導CNV模型是常見(jiàn)的方法。1979年，Ryan等首次采用高功率激光穿透Bruch膜制作出CNV動(dòng)物模型。1989年，Dobi等第一次應用647nm波長(cháng)、120mW的氪激光可造成CNV模型。1998年，Tobe等將氪激光光凝術(shù)應用于制作小鼠CNV模型，此后激光誘導CNV模型被普遍應用于基礎實(shí)驗和治療方法的研究中。藍綠氬激光穿透力較弱，主要作用于視網(wǎng)膜內層和RPE層。氪激光主要作用于RPE和脈絡(luò )膜內層。激光誘導CNV模型的優(yōu)點(diǎn)在于與人類(lèi)CNV疾病發(fā)生自然過(guò)程相似，但不同研究CNV模型成功率不同，與不同實(shí)驗采用動(dòng)物類(lèi)型、激光種類(lèi)及對觀(guān)察診斷CNV的標準不一有關(guān)。

【造模方法】：

1.小鼠 雙眼滴用復方托吡卡胺滴眼液散瞳，腹腔注射1％戊巴比妥鈉(10ml/kg)麻醉小鼠，實(shí)驗眼滴用醫用透明質(zhì)酸鈉凝膠，眼前放置2cm×2cm蓋玻片，經(jīng)裂隙燈用532nm激光功率200mW，光斑直徑100m，曝光時(shí)間100毫秒，距視乳頭1.5-2.0PI左右位置以視乳頭為中心進(jìn)行光凝，其中行CNV模型鑒定和免疫熒光染色組小鼠光凝4~6點(diǎn)／眼；光凝后有氣泡產(chǎn)生標志擊破Bruch膜， 記為有效點(diǎn)。

2.家兔 兔眼激光誘導模型在國內應用較為廣泛，優(yōu)點(diǎn)在于兔眼較之鼠眼大，易于模型實(shí)驗操作與檢查。雙眼散瞳，眼表滴入表面麻醉。每只眼在全視網(wǎng)膜鏡下用氪激光，波長(cháng)647nm，功率700~800mW，光斑直徑50µm，激光功率曝光時(shí)間0.05秒，在視乳頭及髓線(xiàn)下方光凝20個(gè)點(diǎn)，光斑間隔300µm。

3.獼猴 猴的視網(wǎng)膜及黃斑結構與人類(lèi)相似，眼球大小便于操作，具有熒光滲漏的特點(diǎn)，是用于臨床藥物篩選的首選模型。Ryan等利用氬激光，功率200~950mW，光斑直徑50~200µm，曝光時(shí)間0.1~0.5秒。

【模型特點(diǎn)】：

1.小鼠 常采用免疫組化技術(shù)應用CD31標記內皮細胞，在光疑后14天時(shí)CNV模型鼠的視網(wǎng)膜光激部位可見(jiàn)明顯的綠色熒光團塊，表明新生血管形成，從而表示CNV模型誘導成功。

2.家兔 激光斑出現強熒光滲漏為CNV形成，第3~4周見(jiàn)穩定的滲漏光斑，CNV發(fā)生率66.7％，滲漏率51.7％。光凝后3天即有少量光斑出現熒光滲涌，并逐漸增多，21天達高峰，并持續到光凝后56天。OCT顯示造模后7天少量光斑部位色素上皮層反射中斷，其下方局灶性高密度紅白色反射區呈團塊狀、梭形或不規則形，邊緣為瘢痕形成的不規則強反射區，CNV出現；之后CNV逐漸增多，至21天各組達最多；晚期部分CNV瘢痕化。熒光滲漏的計算[（熒光滲漏發(fā)生率＝出現熒光滲漏的激光點(diǎn)數／所觀(guān)察的激光點(diǎn)數）×100％]。

3.猴 光凝猴視網(wǎng)膜出現新生血管以及眼底血管熒光造影觀(guān)察出現血管滲漏，為成功建立了CNV動(dòng)物模型。但相比鼠類(lèi)和家兔，非人類(lèi)靈長(cháng)類(lèi)的CNV滲漏率較低約30％，三度損傷約占70％，四度損傷約為20％~40％。實(shí)驗組應選用8~10只猴才能得到具有統計學(xué)意義的結果。因為猴來(lái)源少，費用高，飼養較困難，模型制作需4周以上，因此應用受限。

【模型評估和應用】：

小鼠激光誘導CNV模型的成功率約為80％，兔的激光誘導CNV模型的成功率約50％，而選用非人類(lèi)靈長(cháng)類(lèi)動(dòng)物激光誘導CNV模型的成功率最低約30％。激光誘導CNV動(dòng)物模型可模擬人類(lèi)濕性AMD疾病，采用這種方法直接損傷脈絡(luò )膜，與人類(lèi)CNV存在共同之處，對于研究濕性AMD的發(fā)病機制與治療方法有重要的臨床價(jià)值。

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