前言

年齡相關(guān)性黃斑變性(age related macular dege­neralion, AMD)是65歲以上老年人致盲的主要原因。AMD分為無(wú)新生血管生成的干性以及新生血管生成的濕性表現。濕性AMD患者發(fā)生CNV是導致視力喪失的最常見(jiàn)因素。本章將介紹CNV的造模方法。

部分造模方法

使用動(dòng)物：大鼠

【造模機制】：

目前認為，強光或者持續光暴露導致的視網(wǎng)膜損傷受到種屬、區域、飲食、光飼養歷史的預處理和基因背景的影響。視網(wǎng)膜氧化光損傷的機制之一，視網(wǎng)膜氧化損傷和感受器細胞損傷反應是轉錄調節、酶活性的變化和激活、細胞內金屬離子、多種凋亡途徑等綜合作用的結果，同時(shí)可能存在種屬依賴(lài)性。

【造模方法】：

在光照方式和強度選擇上，Esfandiari等證實(shí)明暗交替飼養更符合生物的日常生存狀態(tài)，并可降低大鼠視網(wǎng)膜損傷的閾值，造成的損傷更為嚴重。選擇8~9周的成年大鼠，選擇將大鼠置于明暗交替環(huán)境下適應性飼養1周，建模前完全暗適12小時(shí)，用(5000±300) lux強度光照射3小時(shí)，可導致大鼠視網(wǎng)膜重度損傷。根據大鼠的活動(dòng)特性，造模時(shí)間選為晚19 : 00至次日早7: 00。

【模型特點(diǎn)】：

給予1~3小時(shí)光照強度(5000±300) lux的光輻照，均可以導致視網(wǎng)膜電生理功能的降低。不同時(shí)間光輻照后，ERG各測量指標的變化與輻照時(shí)間長(cháng)短有關(guān)，輻照時(shí)間越長(cháng)，改變越明顯，損傷越重，實(shí)驗各組間比較均有明顯的統計學(xué)意義。正常對照組大鼠視網(wǎng)膜組織切片結構層次清晰，光感受器的外節盤(pán)膜排列整齊、規則，內核層和外核層排列緊密，染色均勻。強光輻照對視網(wǎng)膜有明顯的損傷作用，損傷部位主要位于大鼠顳上象限區域，光損傷是一個(gè)級別反應，不同區域損傷程度差異很大。光輻照后不同時(shí)間點(diǎn)，視網(wǎng)膜ONL各區域厚度呈現明顯不同（圖12-5/文末彩圖12-5)。

圖12-5 不同光照時(shí)間下的視網(wǎng)膜損傷模型

注：A．不同光照時(shí)間下視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)對比(×400,Scale bar =50µm); B．不同光照時(shí)間下不同區域視網(wǎng)膜外網(wǎng)層厚度變化(REP：色素上皮層；OS：光感受器外節；IS：光感受器內節；ONL：外核層；OPL：外叢狀層；INL：內核層； IPL：內叢狀層；GCL：神經(jīng)節細胞層）

【模型評估和應用】：

光損傷視網(wǎng)膜疾病動(dòng)物模型，因為各種造模設備的不同，產(chǎn)生的效果不盡相同。實(shí)驗中要保證實(shí)驗動(dòng)物的視網(wǎng)膜能充分地被光照射；在光強的選擇上，要以實(shí)驗目的為基礎，選擇合適的光強；在造模動(dòng)物的年齡上，要注意選擇成年大鼠，Joly等報道給予幼年(2周或者4周）和成年(8周）大鼠同等的光照強度，幼鼠遭受的光照損傷較輕，但這種優(yōu)勢在4周后逐漸消失；并且造模環(huán)境的溫度也是影響實(shí)驗結果的重要因素，本實(shí)驗室發(fā)現在高溫時(shí)會(huì )加重視網(wǎng)膜損傷。

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