前言

骨腫瘤(bone tumor)是發(fā)生于骨骼或其附屬組織（血管、神經(jīng)、骨髓等）的腫瘤，一般原發(fā)于股骨末端、脛骨和肱骨周?chē)?，在青春期長(cháng)骨快速生長(cháng)后被診斷出來(lái)，但其確切病因不明。由于惡性骨腫瘤發(fā)展迅速愈后不佳死亡率高，故研究較為廣泛。骨腫瘤動(dòng)物模型可分為移植性模型和基因修飾模型。其中，可移植腫瘤模型通常又分為同種異體移植和異種動(dòng)物移植，移植腫瘤可以是腫瘤組織塊，也可以是細胞株。

部分造模方法

使用動(dòng)物：大鼠、家兔

【造模機制】：

同種異體移植是在同種或同系動(dòng)物身上移植，機體間即供體和受體間的共性大，容易在機體內停留，生長(cháng)繁殖，再現其腫瘤過(guò)程。通常選用小于6周的Sprague Dawley大鼠（此階段大鼠免疫功能尚未完善），選用大鼠骨肉瘤細胞株UMR106進(jìn)行同種異體骨內原位移植，該細胞株是 20世紀70年代Sprague         Dawley大鼠經(jīng)放射性磷誘導獲得的一種成骨肉瘤細胞株，近來(lái)已被用于構建骨肉瘤的原位移植模型，其成瘤率高，肺轉移能力強，是肺轉移研究的理想細胞株。腫瘤細胞在缺乏有效的免疫監視條件下發(fā)生逃逸生長(cháng)，可獲得較高的成功率。目前可供選擇使用的細胞系或細胞株較多，許多細胞系在世界范圍分布廣泛，并且這些細胞的生物學(xué)特性已經(jīng)比較明確，一般都有明確的背景資料，使一群動(dòng)物同時(shí)接種同樣量的瘤細胞，生長(cháng)速度一致，個(gè)體差異較小，成活率高，易于對照觀(guān)察這些都是便于科研成果相互比較和交流的有利因素。

【造模方法】：

1.大鼠 體外培養大鼠骨肉瘤細胞系UMR-106，獲得對數生長(cháng)期細胞備用。選取30~40日齡的Wistar大鼠，雌雄各半，鹽酸氯胺酮注射液肌內注射麻醉(0.1g/kg)，碘酒消毒下肢，在脛骨上部干骺端內側或股骨下端外側作切口，分離皮下組織暴露骨面后，用直徑1mm克氏針輕柔鉆入骨髓腔，有明顯的落空感，然后用12號輸血針頭沿此空斜鉆入髓腔，挖取其中骨髓和骨松質(zhì)，形成一傾斜通道，用無(wú)血清RPMT1640培養液將備用的骨肉瘤細胞稀釋成5×10⁶/ml，每個(gè)骨髓腔內注射0.2ml，骨蠟封口，依次縫合肌膜、皮膚，消毒切口后包扎，飼養觀(guān)察，4周即可造模成功。

2.家兔 選用VX2細胞株作為研究對象，先在兔后肢肌肉內注射細胞懸液，制備荷瘤兔，3周腫瘤生長(cháng)至直徑約5cm的腫塊時(shí)，取新鮮的魚(yú)肉樣腫瘤組織剪碎，放入200~400目的細胞篩內，擠壓過(guò)濾，并用Hanks液沖洗。收集細胞懸液，以1500r/min離心3分鐘，形成的沉淀小球再次懸浮于Hanks液中，制成1 ×10⁶/ml的腫瘤細胞懸液后，無(wú)菌條件下麻醉實(shí)驗動(dòng)物，于右膝關(guān)節髕骨下方縱行切開(kāi)皮膚長(cháng)約1cm，觸及脛骨平臺，18G的骨穿針經(jīng)脛骨近端關(guān)節面穿刺，穿刺針與脛骨骨干平行，轉動(dòng)穿刺針，當產(chǎn)生落空感時(shí)，穿刺針頭即進(jìn)入骨髓腔內，將穿刺針送入2.0~2.5cm，針尖位于脛骨骨髓腔中上段，注入0.3ml腫瘤細胞懸液，拔針，縫合皮膚。

【模型特點(diǎn)】：

大鼠接種瘤細胞，植入骨內后3周，骺端出現膨大，瘤區皮下可見(jiàn)豐富的迂曲小血管；切面可見(jiàn)皮內質(zhì)破壞斷裂，腫瘤侵及軟組織，腔內外的腫瘤組織呈魚(yú)肉狀；移植后四周，骺端球形膨大，腫塊直徑可達2~3cm大小，質(zhì)中或稍硬，骨皮質(zhì)破壞更明顯，肺門(mén)及邊緣有少量轉移灶，大小不等；移植后6周，腫瘤呈巨球形，質(zhì)稍硬；切面際骨皮質(zhì)已消失，僅見(jiàn)骨干殘端；雙肺見(jiàn)大量轉移瘤，大小不等，部分瘤灶融合，灰白色；移植后7周，右下肢腫瘤直徑可達3~5cm，雙肺廣泛轉移灶，瘤灶融合，正常肺組織結構基本消失。模型鼠自然生存期為7周左右。

【模型評估和應用】：

大鼠模型成功率較裸鼠荷瘤模型略低，但如果將接種后出現生長(cháng)和轉移的瘤體組織勻漿后再接種，成功率將提高。雖然同種動(dòng)物間排斥作用相對較弱，但是不同環(huán)境的個(gè)體，生理狀態(tài)差異很大，因而適當降低其免疫力或改變接種方式，也能達到增加成瘤的效果。該模型試驗周期短，動(dòng)物成本低，便于飼養管理，故被廣泛應用。兔模型通過(guò)經(jīng)脛骨近端關(guān)節面穿刺將腫瘤種植在脛骨中上段的骨髓腔內，可將骨膜受到的機械性損傷減小到最小，且穿刺孔距離腫瘤種植部位相對較遠，腫瘤不易通過(guò)該孔向外生長(cháng)。

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