前言

角膜疾病(cornea disease)對視力的危害性很大，各種角膜疾病引起角膜的混濁是致盲的主要原因之一。目前我國眾多致盲的疾病中，角膜疾病僅次于白內障位居第二。角膜疾病主要包括角膜的炎癥、外傷、先天性異常、變性、營(yíng)養不良及腫瘤等。其中感染性角膜炎在臨床上更為多見(jiàn)，具有重要意義。加強角膜疾病的防治研究已成為減少因角膜疾病致盲的重要措施。

結膜是一層半透明的黏膜，由眼瞼緣間部開(kāi)始覆蓋于眼瞼后和眼球前，可分為上皮層和黏膜下基質(zhì)層。結膜上皮毗鄰于角膜上皮，因此角膜、結膜疾病容易相互影響。角膜的大部分表面暴露于外界，與多種致病因素相接觸。當眼表的特異性和非特異性防御機制減退或外界致病因素增強時(shí)，將引起結膜組織的疾病。其中結膜炎是眼科最常見(jiàn)的疾病之一。

根據疾病類(lèi)型，常見(jiàn)角膜、結膜疾病動(dòng)物模型包括角結膜炎模型、角膜損傷模型、角膜新生血管模型及干眼病模型等。

根據病因的不同，角結膜炎(kerato conjunctivitis) 包括微生物性和非微生物性?xún)纱箢?lèi)。其中微生物性角結膜炎是最常見(jiàn)的，包括細菌性、病毒性、真菌性及偶見(jiàn)的寄生蟲(chóng)性。非微生物性角結膜炎包括物理性因素（紫外線(xiàn)、粉塵等）、化學(xué)性因素（藥品、酸堿、有毒氣體等）和免疫性因素引起的角結膜炎癥反應。角結膜炎引起的損傷不僅與病原體的感染或其他病因的刺激有關(guān)，同時(shí)也與宿主的免疫狀態(tài)密切相關(guān)。

部分造模方法

使用動(dòng)物：家兔

【造模機制】：

角膜實(shí)質(zhì)層占角膜厚度90％，由100~200層排列規則的膠原纖維組成，角膜板層纖維之間有少量的角膜固有細胞。當角膜損傷和炎癥時(shí)，可誘使這些細胞演變?yōu)槌衫w維細胞，參與損傷部位的修復。角膜無(wú)血管，其營(yíng)養來(lái)源于房水、淚膜和角膜緣毛細血管。細菌性角膜炎(bacterial keratitis)炎癥期損傷部位的上皮層及實(shí)質(zhì)層細胞亦可釋放出蛋白水解酶，導致潰瘍變深和增大。眼結膜和淚腺也參與炎癥反應，表現結膜紅腫充血，淋巴細胞、單核細胞、中性粒細胞增多，淚液可沖洗結膜囊和角膜表面。淚液中含有某些抗菌性溶菌酶、免疫球蛋白具有殺菌作用。但機體修復快慢與角膜損傷深淺、細菌毒力強弱、感染細菌量多少有關(guān)。銅綠假單胞菌是目前眼科致病性較強的細菌。由于該菌產(chǎn)生多種溶解酶可引起局部組織的降解，導致機體對細菌產(chǎn)生炎性反應，表現角膜組織破壞甚至穿孔。

【造模方法】：

選用健康家兔，體重2.0kg左右，雌雄不限。造模前進(jìn)行外眼檢查，無(wú)異常者用于造模。造模前先進(jìn)行細菌接種液的制備，將4℃冰箱保存的銅綠假單胞菌接種到普通瓊脂培養基上，36℃環(huán)境培養24~48小時(shí)，用鉑金耳環(huán)刮下菌落，用生理鹽水配成2×10⁹/ml濃度（光電比濁儀測定濃度）。造模時(shí)，用丁卡因對家兔眼進(jìn)行局部輕度麻醉，用環(huán)鉆壓迫角膜無(wú)反應，先后用7mm和4mm直徑角膜環(huán)鉆輕輕按壓角膜順時(shí)針旋轉，造成環(huán)形創(chuàng )傷。拉開(kāi)眼臉成杯形，用1ml注射器吸取2×10⁹/ml菌液滴于兔眼0.1ml/眼，感染單眼。24小時(shí)后觀(guān)察眼部癥狀并進(jìn)行評分，連續觀(guān)察7天。

0級：眼明亮無(wú)分泌物；0.5級：無(wú)分泌物覆蓋，眼稍有紅腫；1級：分泌物覆蓋小于6mm;2級：分泌物覆蓋充滿(mǎn)6mm;3級：分泌物覆蓋大于6mm。

感染后第1、3、5天用無(wú)菌生理鹽水棉簽取感染眼和對照眼分泌物，分別放入4ml生理鹽水中混勻（待檢液）。吸取1ml待檢液加入無(wú)菌培養皿(90mm直徑），將加熱融化再冷卻至45°C左右的營(yíng)養瓊脂倒入培養皿15ml，輕輕順時(shí)針搖勻，待冷凝后置36℃培養箱24小時(shí)，判斷細菌陰陽(yáng)性。

【模型特點(diǎn)】：

接種24~48小時(shí)后，患眼出現大量微黃色分泌物，眼結膜嚴重充血，角膜混濁，雙眼緊閉，膿性分泌物使眼臉粘連，輕輕拉開(kāi)兔眼分泌物覆蓋全角膜，幾乎無(wú)法窺見(jiàn)虹膜瞳孔。第5天除少數眼評分為2.0級外，多數可達3.0級。細菌培養結果：接種后第1、3、5天分泌物培養均呈陽(yáng)性。角膜病理切片顯示：角膜高度水腫、混濁，前1/3基質(zhì)可見(jiàn)大量中性粒細胞、淋巴細胞、成纖維細胞和壞死組織。上皮下傷口潰瘍未愈合。角膜基質(zhì)中可見(jiàn)新生血管，部分切片可見(jiàn)角膜穿孔，前房積膿。虹膜血管擴張、充血并有大量炎細胞浸潤。

【模型的評估和應用】：

本方法采用角膜環(huán)鉆造成角膜損傷其操作簡(jiǎn)單，便于掌握。但造模者手法 的輕重差異，會(huì )造成角膜損傷深淺不一致，在實(shí)驗分組時(shí)應按評分標準均勻分組，使每組動(dòng)物模型炎癥程度無(wú)明顯差異。本法建立的動(dòng)物模型適用臨床抗菌藥物篩選。

參考文獻：

1.邱培瑾. 角膜新生血管的動(dòng)物模型．國外醫學(xué)：眼科學(xué)分冊，2000, 24 (6):360-363

2.胡東東，王嘉容，楊在富．激光眼損傷動(dòng)物校型研究進(jìn)展．軍事醫學(xué)科學(xué)院院刊，2010,5:489-491

3.聶愛(ài)芹，席苗，席興華，等單純疤疹病毒性角膜炎Ⅱ鼠模型的建立及鑒定國際眼科雜志，2012,12(11): 2059-2061

4.徐巖變應性結膜炎動(dòng)物模型眼科研究，2001, 19(2):181-183

5.魏瑞華，郝永娜，趙少貞．自身免疫相關(guān)性干眼動(dòng)物模型的研究進(jìn)展．眼科新進(jìn)展，2012, 32 (7):690-693

6.Calonge MC, Pastor JC, Herreras JM, el al. Pharmacologic modulation of vascular permeability in ocular allergy in the rat. Invest Ophthalmol Vis Sci, 1990, 31 (1): 176-180

7.Marquart ME.Animal models of bacterial keratitis.J Biomed Biotechnol,2011,2011:680642

8.Pavan-Langston D. Herpes simplex virus ocular infections:current concepts of acute, latent and reactivated disease. Trans Am Ophthalmol Soc, 1990,88:727-796