前言

病毒性肝炎(viral hepatitis)是由多種不同肝炎病毒引起的一組以肝臟損害為主的傳染病，可分為甲、乙、丙、丁、戊、庚六種類(lèi)型，各型之間無(wú)交叉免疫，可同時(shí)或先后感染，混合感染或重疊感染，使癥狀加重。甲型病毒性肝炎和戊型病毒性肝炎以糞－口傳播為主，常見(jiàn)發(fā)熱、黃疽，呈急性經(jīng)過(guò)，罕見(jiàn)遷延成慢性；乙型病毒性肝炎和丙型病毒性肝炎，多經(jīng)輸血或血制品以及密切接觸傳播，易遷延發(fā)展成慢性甚至肝硬化，已證實(shí)乙型和丙型肝炎病毒感染與肝癌有一定關(guān)系；丁型病毒性肝炎需依賴(lài)于乙型肝炎病毒而存在并復制，常與乙型肝炎病毒呈混合感染或在乙型肝炎病毒陽(yáng)性的慢性乙肝病程中重疊感染。目前建立的病毒性肝炎動(dòng)物模型主要有甲型肝炎病毒模型、乙型肝炎病毒模型、丙型肝炎 病毒模型和戊型肝炎病毒模型。

乙型肝炎(hepatitis B)是我國乃至世界上嚴重的傳染病之一，尤其在發(fā)展中國家呈現高流行態(tài)勢。世界上每年因乙肝死亡病例約100萬(wàn)例，占死因第7位。我國每年因乙肝死亡約30萬(wàn)例，占傳染病死因第一位。因此，進(jìn)行乙肝發(fā)病機制和抗病毒策略研究顯得非常重要。本部分我們就傳統誘發(fā)性乙肝動(dòng)物模型、人源化小鼠乙肝動(dòng)物模型和基因修飾乙肝動(dòng)物模型進(jìn)行介紹，以供研究者參考。

部分造模方法

使用動(dòng)物：樹(shù)鼩、鴨、旱獺、小鼠

【造模機制】：

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)主要通過(guò)血液和血制品傳播，采用HBV患者血清或HBV DNA，經(jīng)靜脈注射或采用水動(dòng)力高壓注射方式注射到動(dòng)物體內。

【造模方法】：

樹(shù)鼩：將乙肝病毒表面抗原(HBsAg)及乙肝病毒e抗原(HBeAg)均陽(yáng)性的乙肝患者血清0.5ml, 經(jīng)股靜脈接種樹(shù)鼩。

鴨：將鴨乙型肝炎病毒(duck hepatitis B virus,DHBV)經(jīng)靜脈注射、肌內注射、腹腔注射、肝內注射和鴨胚靜脈注射方式注射到鴨體內。

旱獺(woodchuck)：旱獺肝炎病毒(woodchuck hepatitis virus, WHV)是繼人類(lèi)HBV之后發(fā)現的另一個(gè)嗜肝DNA病毒。旱獺慢性感染W(wǎng)HV可逐步發(fā)展為重型肝炎和肝癌，與人類(lèi)感染HBV發(fā)展過(guò)程極為相似。將WHV接種幼齡旱獺，可獲旱獺肝炎模型。

水動(dòng)力法轉染小鼠模型：采用高壓水動(dòng)力法向小鼠尾靜脈注射HBV質(zhì)粒DNA，注射后可在血清中檢測到HBV DNA。

【模型特點(diǎn)】：

樹(shù)鼩：感染HBV后，血液中可檢測到HBsAg、抗HBs或HBV DNA；肝組織免疫組織化學(xué)檢測可見(jiàn)HBsAg和（或）HBcAg;血清ALT升高；Southern blotting可檢測到肝組織中有整合形式存在的HBV DNA。樹(shù)鼩模型成本低、實(shí)驗操作方便、不受動(dòng)物倫理嚴格限制。

鴨：1日齡鴨接種DHBV后感染率可接近100%，且能維持較長(cháng)時(shí)間的病毒血癥，肝臟中也能檢出DHBV DNA。5日齡接種后，DHBV DNA及內源性DNA多聚酶活性下降，14日齡接種后則不產(chǎn)生病毒血癥。感染病毒后機體可同時(shí)出現相應的病毒特異性體液及細胞免疫應答，產(chǎn)生鴨DHBsAg, 且能保持22周。

旱獺：感染WHV后，會(huì )出現WHsAg抗原血癥電鏡下可見(jiàn)特征性的WHV表面和核心顆粒。

水動(dòng)力法轉染小鼠模型：感染HBV后，病毒滴度較高，HbsAg可在體內維持6個(gè)月以上，HBV復制轉錄中間產(chǎn)物可在體內持續檢測達1年。

【模型評估和應用】：

1996年，Walter等人報道樹(shù)鼩新生期接種人HBV，結局類(lèi)似于人的急性自限性肝炎，成年期接種則表現為一過(guò)性感染。幼年和圍生期樹(shù)鼩接種HBV，可提高感染效率。新生樹(shù)鼩接種人HBV，病毒可在動(dòng)物體內長(cháng)期存在并穩定復制。2012年，在樹(shù)鼩原代肝細胞中找到了乙肝病毒和丁肝病毒的共受體－鈉離子－?；悄懰峁厕D運多肽，因而樹(shù)鼩有望成為人HBV可靠的動(dòng)物模型。

鴨感染DHBV后的病毒血癥與鴨齡成相關(guān)性，DHBV的感染時(shí)機是影響感染率及預后的重要因素。1日齡鴨腹腔注射感染DHBV后，2周后陽(yáng)性率為89％左右，4周后可達94％左右，并持續22周。而10日齡感染后，2周后陽(yáng)性率僅16％左右，4周后38％左右，6周后可達61.1%，12周后，約1/2的DHBV陽(yáng)性鴨表現為DHBsAg及DHBV    DNA轉陰。鴨模型DHBV感染率高，易喂養，是一種評估臨床前期抗病毒藥物治療效果的良好模型。然而DHBV屬禽類(lèi)嗜肝病毒與人HBV在結構上有較大差別，而且鴨在進(jìn)化上與人類(lèi)差別較大，因此不能很好地再現人HBV感染過(guò)程。

WHV感染新生旱獺多呈慢性感染，可用于研究HBV的慢性化機制，用于HBV疫苗及抗病毒藥物的開(kāi)發(fā)和HBV生活周期、分子機制、感染及癌變機制的相關(guān)研究。但是，旱獺肝炎病毒動(dòng)物模型不能直接感染HBV,WHV與HBV依舊存在一定的差異，不能完全模擬HBV的病理過(guò)程。

水動(dòng)力法轉染小鼠模型：該模型可用于研究HBV生活史、慢性感染機制，并可特異性定位突變HBV-DNA，研究單個(gè)或多個(gè)基因在HBV感染進(jìn)程中的作用機制；同時(shí)，由于是免疫全能小鼠，可用于研究病毒引起的免疫效應機制。

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