細胞樣本寄送要求

1、冷凍儲存運輸（凍存株）

干冰運輸凍存細胞。外地寄送時(shí)，干冰消耗量約為4-5kg/24h（根據溫度會(huì )有所變動(dòng)），請根據寄送時(shí)長(cháng)訂購足量干冰，用厚實(shí)的泡沫箱進(jìn)行運輸。

2、充液法常溫運輸（T25瓶）

一般選擇生長(cháng)良好的細胞，以生長(cháng)60%~70%為宜，去掉舊培養液，補充新的培養液至瓶頸部，保留微量空氣，擰緊瓶蓋，并用封口膜密封，放在運送盒內，用棉花等做防震防壓處理。常溫，到達目的地后倒出多余的培養液，只需保留維持生長(cháng)所需的培養液置37℃培養，次日傳代。

提示：細胞寄送時(shí)，需告知細胞名稱(chēng)、培養條件及凍存條件。

細胞流式檢測樣本采集要求

1、流式凋亡樣本送樣要求

【樣本收集】

貼壁細胞：

① 取出孔板（皿），小心收集上層清液于對應編號的離心管中留用;

② 用不含EDTA胰酶消化，待細胞質(zhì)回縮，細胞之間不再連接成片，則終止消化；

③ 吸出懸液到離心管中（與同編號留用液體混合），離心收集細胞，加入適量無(wú)鈣PBS洗滌1次，離心收集細胞沉淀；

④ 在細胞沉淀中加入適量無(wú)鈣PBS重懸細胞，并將懸液轉移至1.5ml尖底EP管中，離心收集細胞沉淀，使用試劑盒自帶的binding buffer重懸，4℃運輸置實(shí)驗室（細胞量不低于1×10^5為宜）。

懸浮細胞：

① 取出孔板（皿），收集細胞懸液于對應編號的離心管中留用；

② 離心收集細胞，加入適量無(wú)鈣PBS洗滌1次，離心收集細胞沉淀；

③ 在細胞沉淀中加入適量無(wú)鈣PBS重懸細胞，并將懸液轉移至1.5ml尖底EP管中；

④ 離心收集細胞沉淀，使用試劑盒自帶的binding buffer重懸，4℃運輸置實(shí)驗室（細胞量不低于1×10^5為宜）。

注意事項：

① 使用不含EDTA的胰酶消化收集細胞;

② 用無(wú)鈣PBS或者binding buffer（1x）重懸于1.5ml尖底EP管中（如果兩者均沒(méi)有，則用培養基重懸，送到本實(shí)驗室再進(jìn)行洗滌與染色），4℃運輸置實(shí)驗室。細胞密度不低于1×10^5；

③ 樣本運輸至實(shí)驗室后，再行染色，若樣品本身帶熒光，請提前告知；

④ 公司常備試劑盒為：AnnexinV-APC/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒（凱基）;

⑤ 送樣前請至少提前一天預約，并告知相關(guān)信息（具體例數、檢測內容、特殊要求等）。

2、流式ROS樣本送樣要求

貼壁細胞：

① 取出孔板（皿），用胰酶消化，待細胞質(zhì)回縮，細胞之間不再連接成片，則終止消化；

② 吸出懸液到離心管中，離心收集細胞，加入適量PBS洗滌1次，離心收集細胞沉淀；

③ 在細胞沉淀中加入適量PBS重懸細胞，并將懸液轉移至1.5ml尖底EP管中，離心收集細胞沉淀；

④ 使用4℃預冷PBS或者無(wú)血清培養基重懸，4℃運輸至實(shí)驗室（細胞量不低于1×10^6為宜）。

懸浮細胞：

① 取出孔板（皿），離心收集細胞，加入適量PBS洗滌1次，離心收集細胞沉淀；

② 在細胞沉淀中加入適量PBS重懸細胞，并將懸液轉移至1.5ml尖底EP管中，離心收集細胞沉淀；

③ 使用4℃預冷PBS或者無(wú)血清培養基重懸，4℃運輸至實(shí)驗室（細胞量不低于1×10^6為宜）。

注意事項：

① 用PBS重懸于1.5ml尖底EP管中（如果沒(méi)有，則用無(wú)血清培養基重懸，送到本實(shí)驗室再進(jìn)行洗滌與染色），4℃運輸至實(shí)驗室。細胞密度不低于1×10^6；

② 樣本運輸至實(shí)驗室后，再行染色，若樣品本身帶熒光，請提前告知；

③ 公司常備試劑盒為：活性氧檢測試劑盒（碧云天）;

④ 送樣前請至少提前一天預約，并告知相關(guān)信息（具體例數、檢測內容、特殊要求等）。

3、流式周期樣本送樣要求

貼壁細胞：

① 吸棄上層培養基，PBS洗滌細胞1次，吸棄液體；

② 胰酶消化，待細胞質(zhì)回縮，細胞之間不再連接成片，加入新鮮培養基終止消化并收集懸液于對應編號離心管中，離心棄上清；

③ 加入適量PBS洗滌2次，離心收集細胞沉淀；

④ 用75％預冷乙醇重懸細胞，低溫運輸至實(shí)驗室（細胞量為1×10^6為宜）。

懸浮細胞：

① 收集細胞懸液于對應編號的離心管中，離心收集細胞沉淀；

② 加入適量PBS洗滌2次，離心收集細胞沉淀；

③ 用75％預冷乙醇重懸細胞，低溫運輸至實(shí)驗室（細胞量為1×10^6為宜）。

注意事項：

① 周期細胞量為1×10^6為宜。采用尖底EP管/離心管，運輸樣本，可減少后期處理時(shí)樣本的損耗；

② 固定后的細胞，4℃可存放一周左右，-20℃可存放一個(gè)月左右。短時(shí)間內不檢測的話(huà)，建議保證冰乙醇的最終濃度為50%左右，避免樣品粘度太高，影響后續實(shí)驗結果；

③ 外地送樣，可在加入75％預冷乙醇固定后，低溫（泡沫盒+冰袋）郵寄至公司；

④ 送樣前請至少提前一天預約，并告知相關(guān)信息（具體例數、檢測內容、特殊要求等）。

4、流式JC-1樣本送樣要求

貼壁細胞：

① 取出孔板（皿），用胰酶消化，待細胞質(zhì)回縮，細胞之間不再連接成片，則終止消化；

② 吸出懸液到離心管中，離心收集細胞，加入適量PBS洗滌1次，離心收集細胞沉淀；

③ 在細胞沉淀中加入適量無(wú)鈣PBS重懸細胞，并將懸液轉移至1.5ml尖底EP管中，離心收集細胞沉淀；

④ 使用4℃預冷PBS或者無(wú)血清培養基重懸，4℃運輸至實(shí)驗室（細胞量不低于1×10^6為宜）。

懸浮細胞：

① 取出孔板（皿），離心收集細胞，加入適量PBS洗滌1次，離心收集細胞沉淀；

② 在細胞沉淀中加入適量PBS重懸細胞，并將懸液轉移至1.5ml尖底EP管中，離心收集細胞沉淀；

③ 使用4℃預冷PBS或者無(wú)血清培養基重懸，4℃運輸至實(shí)驗室（細胞量不低于1×10^6為宜）。

注意事項：

① 用PBS重懸于1.5ml尖底EP管中（如果沒(méi)有，則用無(wú)血清培養基重懸，送到本實(shí)驗室再進(jìn)行洗滌與染色），4℃運輸至實(shí)驗室。細胞密度不低于1×10^6個(gè)/ml；

② 樣本運輸至實(shí)驗室后，再行染色，若樣品本身帶熒光，請提前告知；

③ 公司常備試劑盒為：線(xiàn)粒體膜電位檢測檢測試劑盒（碧云天）；

④ 送樣前請至少提前一天預約，并告知相關(guān)信息（具體例數、檢測內容、特殊要求等）。

5、流式組織樣本送樣

將新鮮組織置于預冷PBS中，4℃運輸至實(shí)驗室。若樣品本身帶熒光，請提前告知。

6、流式血液樣本送樣要求

抗凝全血(大多數采用肝素鈉/EDTA抗凝)，采集后室溫保存，盡量2h內送達實(shí)驗室。

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