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1、動(dòng)物組織采集
①?取材應在冰上進(jìn)行,取材后組織用生理鹽水沖洗干凈,去除血漬和污物,并剔除非研究所需的組織特別是腸道組織,請一定注意清理干凈腸道內容物;部分特別容易降解的樣本,如胰腺,有條件可以使用“蛋白穩定保存液”“蛋白穩定保存液”具體使用方法和用量,建議參考對應廠(chǎng)家的試劑說(shuō)明書(shū)。
② 吸干水漬并切小塊,放入已標記的凍存管中,液氮速凍后,轉運至-80℃冰箱保存,運輸時(shí)請使用大體積干冰運輸。
干冰消耗量約為4-5kg/24h(根據溫度會(huì )有所變動(dòng)),請根據寄送時(shí)長(cháng)訂購足量干冰,用厚實(shí)的泡沫箱進(jìn)行運輸。
2、細胞樣本準備
① 細胞培養或處理結束后,去除培養液;
② 用滅菌后的PBS緩沖液快速沖洗細胞,而后加入少量滅菌后的PBS,細胞刮將細胞刮下,移于1.5ml離心管中;
③ 快速離心去除上清,收集細胞,液氮速凍后放入干冰或于-80℃冰箱中保存。
3、血液樣本采集
全血提取白細胞進(jìn)行檢測:
將新鮮全血收集于肝素鈉(綠頭)或EDTA(紫頭)抗凝管中,上下輕輕顛倒幾次使血液與抗凝劑充分混勻,置于4°C或冰盒中正立放置,在離體1h之內進(jìn)行白細胞提?。ò准毎杉唧w方法需參考各種分離液試劑說(shuō)明書(shū))。
如果遠距離運輸不能保證時(shí)效性,請客戶(hù)自己提取好白細胞后,送白細胞沉淀送檢
4、菌類(lèi)
液體培養基:
挑取單菌落于50ml液體培養基中,適宜溫度培養過(guò)夜,并在對數生長(cháng)期進(jìn)行菌體采集。培養好的菌液適量轉入合適的離心管中,高速離心收集菌體,棄去上層培養基,用封口膜封口后液氮速凍,轉運至-80℃冰箱保存,大體積干冰運輸;
固體或半固體培養菌種收集:
涂布平板培養的微生物,在菌體生產(chǎn)最旺盛時(shí)期刮下,置于1.5或2.0ml的離心管中,迅速液氮速凍。-80℃冰箱保存,轉運至-80℃冰箱保存,大體積干冰運輸。
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樣本準備注意事項:
① 為保證實(shí)驗結果,需盡量準備新鮮或正確保存的樣品或蛋白提取液,陽(yáng)性對照樣品(細胞或組織)等。
② WB實(shí)驗樣品參考樣本含量:
(1)細胞不少于1×10^7個(gè);
(2)組織樣品不少于50mg;
(3)總蛋白濃度(細胞不低于3μg/μl,組織不低于5μg/μl);
③ 樣本標簽勿粘貼在EP管或錫箔紙上,低溫下標簽紙易脫落,建議使用記號筆標記;
④ 細胞樣本不建議采用粘稠保護劑保存,否則將無(wú)法離心收集存放在保護劑的細胞樣本。
如果組織是多平臺之間共用樣本,強烈建議客戶(hù)在送樣之前進(jìn)行分裝,分別送給對應平臺,避免影響時(shí)效性,規避樣本反復凍融的風(fēng)險