注：以下所有樣本盡量新鮮！

1、動(dòng)物組織采集（樣本量盡量保證在綠豆大小，約200mg以上）

① 取材應在冰上進(jìn)行，取材后組織用生理鹽水沖洗干凈，去除血漬和污物，并剔除非研究所需的組織；

② 吸干水漬并切小塊，放入已標記的凍存管中，液氮速凍后，轉運至-80℃冰箱保存。

2、貼壁細胞RNA采集樣本（樣本量1*10^8以上）

RNA試劑盒法：

① 用微量移液器將細胞培養液吸除干凈，加入1ml 4℃預冷PBS溶液，輕搖洗滌；

② 將PBS吸除干凈后，再加入1ml PBS，用細胞刮收集細胞，3000rpm離心10min，棄去上清液，收集細胞沉淀，液氮速凍后轉運至-80℃冰箱保存；

③ 使用RNA提取試劑盒提取RNA，具體提取方法以試劑盒說(shuō)明書(shū)為準。提取樣本經(jīng)液氮速凍后轉運至-80℃冰箱保存。

Trizol法：

① 貼壁細胞培養或處理結束后，去除培養液；

② 每10c㎡培養面積加入1ml Trizol試劑；

③ 用1ml槍頭反復吹打,使Trizol與細胞充分接觸并消化；

④ 將上述溶液轉移到試管中，用一次性注射器（或者槍頭）反復吹打細胞，直至看不見(jiàn)成團的細胞塊，使溶液呈現清亮且不粘稠的狀態(tài)；

⑤ 經(jīng)液氮速凍后轉運至-80℃冰箱保存。

3、懸浮細胞RNA采集（樣本量1*10^8以上）

RNA試劑盒法：

① 懸浮細胞培養或處理結束后，3000rpm，離心10min，去除培養液；

② 收集細胞后，加入1ml 4℃預冷PBS溶液，輕搖洗滌，3000rpm，離心10min，棄去上清液，收集細胞沉淀，液氮速凍后轉運至-80℃冰箱保存；

③ 使用RNA提取試劑盒提取RNA，具體提取方法以試劑盒說(shuō)明書(shū)為準。提取樣本經(jīng)氮速凍后轉運至-80℃冰箱。

Trizol法：

① 懸浮細胞培養或處理結束后，離心收集細胞，去除培養液

② 保留的細胞用PBS快速洗一次，離心除去PBS；

③ 每1×10^6個(gè)細胞加1ml Trizol試劑，用一次性注射器進(jìn)行反復吹打直至看不見(jiàn)成團的細胞塊，整個(gè)溶液呈清亮且不粘稠的狀態(tài)；

④ 經(jīng)液氮速凍后轉運至-80℃冰箱保存。

4、血液樣本采集

全血樣本(以下方法步驟僅供參考）

哺乳動(dòng)物需要采集白細胞進(jìn)行后續實(shí)驗，（具體方法需參考各種分離液試劑說(shuō)明書(shū)）

① 將新鮮全血收集于抗凝管中，上下輕輕顛倒幾次使血液與抗凝劑充分混勻，置于4°C或冰盒中正立放置；

② 每1ml新鮮抗凝血中加入10ml紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解4-5分鐘；

③ 加入20-30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養液；

④ 2400rpm-2700rpm離心5分鐘，棄紅色上清；

⑤ 重復步驟③和步驟④，直至紅細胞裂解完全，收集細胞沉淀；

⑥ 每1×10^6個(gè)細胞加入1ml Trizol試劑，液氮速凍后，轉運至-80℃冰箱保存。

5、血清樣本采集（備注：因其RNA豐度很低，PCR可能擴增不出來(lái)）

① 用無(wú)抗凝劑血清管收集全血樣本，預留一定空間便于血清分離，置于4°C或冰盒中正立靜置10-20分鐘；

② 3000-3500rpm，離心10-15分鐘，取上清于離心管（RNasefree）中;

③ 將分裝好的血清轉運至-80℃冰箱保存。

6、血漿樣本采集（備注：因其RNA豐度很低，PCR可能擴增不出來(lái)）

① 將新鮮全血收集于抗凝管中，上下輕輕顛倒幾次使之與抗凝劑充分混勻，置于4°C或冰盒中正立靜置10-20分鐘；

② 3000-3500rpm，離心10-15分鐘，取上清于離心管中;

③ 將分裝好的血漿轉運至-80℃冰箱保存。

7、菌類(lèi)（1*10^8 CFU以上的菌體）

液體培養基：

① 挑取單菌落于50ml液體培養基中，適宜溫度培養過(guò)夜，并在對數生長(cháng)期進(jìn)行菌體采集；

② 培養好的菌液適量轉入合適的離心管中，高速離心收集菌體，棄去上層培養基，用封口膜封口后液氮速凍，轉運至-80℃冰箱保存，大體積干冰運輸；

固體或半固體培養菌種收集：

① 涂布平板培養的微生物，在菌體生產(chǎn)最旺盛時(shí)期刮下，置于1.5或2.0ml的離心管中，迅速液氮速凍。

② -80℃冰箱保存，轉運至-80℃冰箱保存，大體積干冰運輸。

樣本準備注意事項：

① 小體積的昆蟲(chóng)類(lèi)組織，如寄生蜂、螨等，可考慮用RNA保護劑進(jìn)行樣本收集，RNA保護劑的使用參照試劑說(shuō)明書(shū)；

② 所有直接接觸樣本的試劑、耗材等物品均需要處于無(wú)RNA酶（RNasefree）環(huán)境；

③ 肝素會(huì )影響下游建庫測序，EDTA不適用于部分成分分析及PCR實(shí)驗，采集血液樣本時(shí)需根據檢測需求慎重選擇抗凝劑；

④ RNA樣本提取可采用RNA試劑盒、Tirzol法等，注意RNA樣本的純化，避免多糖多酚、蛋白和其它雜質(zhì)的殘留。提取完成后，提供Nanodrop、AGE或Agilent 2100中一種或多種形式的分析結果以判斷RNA的完整性、濃度、總量是否滿(mǎn)足需求。寄送TotalRNA的需注明提取所用的方法，如試劑盒或Tirzol法等；

⑤ 樣本標簽勿粘貼在EP管或錫箔紙上，低溫下標簽紙易脫落，建議使用記號筆標記；

⑥ 細胞樣本不建議采用粘稠保護劑保存，否則將無(wú)法離心收集存放在保護劑的細胞樣本；

⑦ RNAlater、RNAstore等保護劑在25℃下能穩定保存樣本3天，4℃保存樣本7天、-20℃條件下可長(cháng)期保存樣本。建議用保護劑保存的樣本厚度不超過(guò)0.5cm。保護劑不適用于血液和液態(tài)樣本，組織樣本與保護劑的用量至少為1:10，RNAstore不適用于植物樣本保存。（不同保護劑保存時(shí)間有差異，具體以保護劑說(shuō)明書(shū)為準）；

⑧ Trizol為裂解液，不適用于組織樣本的保存，細胞除外。當細胞存放在Trizol中需注明每管的細胞數量。

樣本寄送注意事項：

① 樣本需要使用干冰進(jìn)行寄送，干冰消耗量為4-5kg/天（根據溫度會(huì )有所變動(dòng)），訂購量以快遞實(shí)際運輸天數為準（避開(kāi)大型節假日及線(xiàn)上購物節）。干冰采用厚實(shí)的泡沫箱進(jìn)行打包，外側用透明膠封好；

② 樣本寄送我司時(shí)需填寫(xiě)《項目送樣單》。送樣單中樣本信息、數量、分組與編號需與實(shí)際保持一致，紙質(zhì)版送樣單隨樣本寄出,電子版送樣單及寄送快遞單號發(fā)送給公司，以便核對及備份數據；

③ 在我司完成測序分析后，剩余樣本需要返還的項目，需在收到項目完整版結題報告3個(gè)月內聯(lián)系我司進(jìn)行樣本返還，逾期樣本將進(jìn)行銷(xiāo)毀。如果樣本特別珍貴，需提前說(shuō)明。樣本返回需要送樣方承擔返還費用（包括干冰費和快遞費）；

④ 為確保實(shí)驗的順利，送檢方需盡可能提供樣本，以防部分樣本降解重新取材、制備或送樣，耽誤檢測進(jìn)程。